药材及成方制剂显微鉴别法

"药材及成方制剂显微鉴别法

显微鉴别系指用显微镜对药材的切片、粉末、解离组织或表面制片及成方制剂中药味的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性的样品，根据各该药材鉴别项的规定制片。成方制剂根据不同剂型适当处理后制片。

一、横切片或纵切片：选取药材适当部位，软化后用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片,选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液处理后观察。必要时可包埋后切片。

二、粉末制片：取粉末少量，置载玻片上，摊平，选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它适当试液处理后观察。

三、表面制片：将样品湿润软化后,切取一部分或撕取其表皮,加适宜的试液观察。

四、解离组织片：如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，可用氢氧化钾法；如果品坚硬，木化组织较多或集成较大群束，可用硝铬酸法或氯酸钾法。在解离前，应先将样品切成宽或厚约2mm的小条或片。

1．氢氧化钾法

置样品于试管中，加5％氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出少量置载玻片上，用解剖针撕开，以稀甘油装置观察。

2．硝铬酸法

置样品于试管中,加硝铬酸试液适量，放置，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照1．法操作装置。

3．氯酸钾法

置样品于试管中，加硝酸溶液(1→2)及氯酸钾少量,缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照1．法操作装置。

五、花粉粒与孢子制片：取花粉、花药（或小的花朵）或孢子囊群（干燥样品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒捣碎，过滤于离心管中，离心，取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸(9∶1)的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次,加50％甘油与1％苯酚3～4滴,用品红甘油胶封藏观察。也可用水合氯醛试液装置观察。

六、细胞及细胞内含物等的测量：在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小，可用目镜测微尺测量。先将目镜测微尺装入目镜内，用镜台测微尺标化。标化时，转动目镜，移动镜台测微尺，使两种量尺的刻度平行，左边的“0” 刻度重合，再找第二条重合刻度。根据两条重合刻度间两种量尺的小格数，计算出目镜测微尺每小格在该物镜条件下所相当的大小（μm）。测量时,以目镜测微尺测量目的物的小格数，乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物镜下进行，但欲测量较长的如纤维、非腺毛等的长度时,则以在低倍物镜下测量较为方便。记录最大值与最小值（μm）,可允许有少量略高或略低于药典规定的数值。

七、细胞壁性质的检定：

1．木质化细胞壁

加间苯三酚试液1～2滴，稍放置，加盐酸1滴,因木化程度不同,显红色或紫红色。

2．木栓化或角质化细胞壁

加苏丹Ⅲ试液，稍放置或微热，显橘红色至红色。

3．纤维素细胞壁

加氯化锌碘试液；或先加碘试液湿润后，稍放置,再加硫酸溶液(33→50)；显蓝色或紫色。

4．硅质化细胞壁

加硫酸无变化。

八、细胞内含物性质的检定：

1．淀粉粒

（1）加碘试液，显蓝色或紫色。

（2）用甘油醋酸试液装置，置偏光显微镜下观察,未糊化的淀粉粒显偏光现象；已糊化的无偏光现象。

2．糊粉粒

（1）加碘试液，显棕色或黄棕色。

（2）加硝酸汞试液,显砖红色。材料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验。

3．脂肪油、挥发油或树脂（1）加苏丹Ⅲ试液，显橘红色、红色或紫红色。

（2）加90％乙醇，脂肪油不溶解（篦